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摘要
目的 筛选与茯苓Poriacocos生长发育相关的细胞色素P450基因序列，进一步丰富对茯苓生长发育理解。方法通过分子克隆到1个茯苓细胞色素P450基因Pc CYP，并利用在线工具分析其序列，预测蛋白的理化性质、结构域等分子特征；利用MEGA5.0分别对氨基酸进行多序列比对和进化关系分析，并采用q RT-PCR方法检测不同发酵培养时间6、8、10d的相对表达量。结果 从茯苓中克隆到的Pc CYP存在可变性剪切，2个选择性剪切体PcCYP1和Pc CYP2CDS区长度分别为1590、1542bp，分别编码529、513个氨基酸。氨基酸序列分析发现其均具有保守的P450结构域，且具有信号肽和多个磷酸化修饰位点，属于分泌型的不稳定亲水蛋白。氨基酸序列多重比对及系统发育树结果显示PcCYP与担子菌Coprinopsis cinerea的CYP502距离最近，推测PcCYP和CYP502具有相似功能，即参与调控茯苓子实体的发育。定量PCR结果显示，选择性剪接变体Pc CYP1的表达量较Pc CYP2低，因此PcCYP2是Pc CYP基因的主要剪接体。结论 Pc CYP与茯苓子实体的生长发育密切相关，为进一步研究Pc CYP在茯苓生长发育、遗传规律及育种等方面的生物学功能奠定基础。
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