四种不同血清型IBV的多重PCR鉴定方法的建立

作者：晏文俊; 付雪; 龚慧玲; 倪瑞琪; 王凯禄; 李豪; 雷昌伟; 王红宁; 杨鑫^*

来源：中国家禽, 2021, 43(04): 24-29.

DOI：10.16372/j.issn.1004-6364.2021.04.005

• IBV
• 疫苗
• 多重PCR
• 检测方法

为了建立同时区分4种不同血清型IBV的多重PCR方法,试验针对IBV H120型、4/91型、QX型、LDT3型4种常用商用疫苗株的S1基因序列,分别设计特异性引物,并对退火温度、循环数和引物浓度等条件进行优化及特异性、敏感性、重复性等试验。结果表明:试验可特异性的扩增出IBV LDT3型(860 bp)、H120型(679 bp)、4/91型(499 bp)、QX型(373 bp)毒株的目的条带。该检测方法仅对IBV的四种疫苗株检测为阳性,对NDV La Sota株、ALVJS09GY3株、ILTV Connecticut株、MDV CVI988株、FAd V SCneijiang株、IBV GI-19型、IBVGI-28型以及IBV GI-13型为阴性,对LDT3型、H120型、4/91型、QX型四种不同血清型的IBV重组质粒的检测下限分别为1.13×105copies/μL、7.56×104copies/μL、4.61×106copies/μL和2.94×104copies/μL。相同条件下进行重复性试验可获得一致性的结果。应用建立的多重PCR方法对2019年市场上收集的20种不同厂家以及不同生产批号的IB疫苗产品进行检测,产品毒株种类标识与实际样品符合率为55%,而45%的IB疫苗毒株与实际标识不符,说明部分疫苗中存在其他IB疫苗株的污染。研究建立的多重PCR方法可应用于市场上不同IB疫苗毒株的鉴定以及临床疫苗样品毒株单一性检测,为IB疫苗的使用提供参考。

• 单位
  四川大学; 生命科学学院; 生物资源与生态环境教育部重点实验室