牛分枝杆菌PPE13蛋白基因的表达及其表达产物的功能分析

作者：何萍; 徐翩翩; 杨杨^*; 宋厚辉^*

来源：中国兽医科学, 2018, 48(12): 1548-1553.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2018.0214

• 牛分枝杆菌
• PPE13
• 耻垢分枝杆菌
• 巨噬细胞
• 细胞死亡
• IL-6

为了探索PPE13蛋白在牛分枝杆菌感染宿主细胞中所发挥的具体调控作用,本研究利用分子克隆技术构建了表达PPE13蛋白的耻垢分枝杆菌重组菌株MsPPE13。首先采用PCR技术扩增mb0902c(PPE13)基因片段,将其克隆于载体pMN437中。挑取阳性克隆测序后,将重组质粒电转至耻垢分枝杆菌中,通过Western-blot方法检测PPE13蛋白是否在耻垢分枝杆菌中表达。然后测定重组菌株MsPPE13的体外生长曲线、感染该菌的巨噬细胞的死亡情况以及使用荧光定量PCR方法检测巨噬细胞内炎症相关因子IL-6、TNF-α和i NOS的表达情况,以初步探索PPE13的功能。结果显示,PPE13蛋白可在耻垢分枝杆菌中表达,并且PPE13的表达不影响耻垢分枝杆菌在体外的生长。另外,使用耻垢分枝杆菌感染巨噬细胞后,发现PPE13可促进巨噬细胞的死亡,并且促进IL-6的表达。上述研究结果为进一步探索PPE13蛋白调控牛分枝杆菌感染的具体机制提供了新的线索。

• 单位
  浙江农林大学; 动物科技学院