红麻线粒体基因atp6过表达载体的构建与转化

作者：韦美玲; 廖小芳; 李枝玲; 周步进; 郑杰; 孔祥军; 刘一丁; 李宏伟; 周瑞阳^*

来源：西南农业学报, 2019, 32(12): 2740-2746.

DOI：10.16213/j.cnki.scjas.2019.12.004

• 红麻
• 细胞质雄性不育(CMS)
• atp6基因
• 过表达载体
• 转化

【目的】构建红麻线粒体基因atp6过表达载体遗传转化体系,为红麻线粒体基因的遗传转化及功能研究打下基础。【方法】以红麻UG93A花药cDNA为模板,通过同源克隆技术克隆atp6基因编码区(CDS)的全长序列;利用In-Fusion基因融合技术构建植物过表达载体,通过农杆菌介导法转化野生型烟草,并对转基因阳性烟草植株进行抗性筛选和PCR验证。【结果】红麻UG93A的atp6基因CDS全长为1182 bp,成功构建红麻atp6基因全长过表达载体pBI121-atp6-EGFP,并获得4株转基因烟草植株(B1、B2、B3和B4),使用过表达载体上3对不同位点的引物组合对转基因植株进行PCR验证,发现有2株转基因烟草植株在3对不同引物中稳定表达,即获得2株含pBI121-atp6-EGFP的T0代转基因阳性植株(B1和B2)。【结论】构建的红麻线粒体基因atp6过表达载体遗传转化体系,可用于指导后续atp6基因调控红麻细胞质雄性不育(CMS)分子机理研究。

• 单位
  广西壮族自治区农业科学院经济作物研究所; 广西大学