摘要
[目的]探究干扰膜联蛋白A3(ANXA3)基因表达对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响以及可能作用机制。[方法]以乳腺癌MCF-7细胞为研究对象,RNA干扰技术沉默ANXA3基因表达,荧光定量RT-PCR和Western Blot检测转染后细胞中ANXA3 m RNA及蛋白表达;四甲基偶氮唑(MTT)法检测细胞的增殖能力变化,膜联蛋白V-FITC(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞的凋亡率,蛋白质印迹法(Western Blot)检测细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)蛋白的水平。[结果]空白对照组、阴性对照组和ANXA3干扰组细胞中ANXA3 m RNA的表达量分别为0.078±0.006、0.072±0.007和0.008±0.001;ANXA3蛋白表达量分别为0.792±0.085、0.764±0.078和0.353±0.039;细胞的凋亡率分别为(3.425±0.643)%、(3.537±0.740)%、(23.455±3.686)%;Bcl-2蛋白水平分别为1.256±0.247、1.239±0.265、0.624±0.065;Bax蛋白水平分别为0.856±0.086、0.842±0.079、1.526±0.344;Cleaved Caspase-3蛋白水平分别为0.522±0.057、0.535±0.062、1.230±0.367。与空白对照组相比,ANXA3干扰组细胞中ANXA3 mRNA和蛋白水平显著性降低(P<0.05),细胞的增殖能力显著性降低(P<0.05),其凋亡率显著性增加(P<0.05);细胞中Bcl-2蛋白水平显著性下调(P<0.05),Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达量显著性上调(P<0.05)。[结论]干扰ANXA3表达抑制乳腺癌细胞增殖,诱导其凋亡,其作用与Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白水平变化引起的细胞凋亡通路的变化有关。
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单位大连大学附属中山医院