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摘要
目的对稻瘟菌角质酶MGG09100进行生物信息学分析及原核表达。方法应用在线程序分析稻瘟菌角质酶MGG09100蛋白的保守结构域、信号肽剪切位点及跨膜结构域。PCR法扩增稻瘟菌角质酶MGG09100基因,克隆至原核表达载体pETM-10,构建原核表达质粒pETM10-MGG09100。重组质粒转化感受态E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达、变性、复性后,进行Ni-NTA亲和层析及分子筛层析分离纯化。结果稻瘟菌角质酶属α/β水解酶超家族,在第18和19个氨基酸之间存在信号肽剪切位点,前20个氨基酸中可能出现跨膜结构。经菌落PCR及测序验证,重组表达质粒pETM10-MGG09100构建正确。IPTG诱导表达产物大部分以包涵体形式存在,经变性、复性、纯化后,可溶性重组蛋白的相对分子质量约24 000,浓度可达6 mg/mL。结论成功构建了原核表达质粒pETM10-MGG09100,获得了可溶性稻瘟菌角质酶MGG09100蛋白。本研究为该蛋白的功能及水稻稻瘟病致病机理的深入研究奠定了基础。
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