新城疫病毒F抗原表位片段的原核表达及鉴定

作者：刘欢欢; 孙晓莹; 杨雨晴; 李岩; 陈小燕; 张连妹; 余丽芸; 侯喜林^*

来源：黑龙江畜牧兽医, 2019, (11): 88-91.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2018.10.0074

• 新城疫病毒
• F蛋白
• 原核表达
• 包涵体
• 纯化
• Western-blot

为了获得部分具备有效免疫原性的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)F蛋白,试验采用RT-PCR方法获得大小为564 bp的含NDV F蛋白部分抗原表位的特异性片段,将其与pET-32a(+)原核表达载体连接,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,通过改变诱导时间及IPTG浓度摸索其最佳诱导条件。重组蛋白超声破碎后,沉淀用1%TritonX-100磷酸盐缓冲液洗涤以去除蛋白碎片及膜蛋白。蛋白经尿素变性后采用Ni-NTA agrose纯化,再用梯度透析法复性,最后用Western-blot方法鉴定蛋白的反应原性。结果表明:通过酶切和测序证实pET-32a-F阳性重组质粒构建成功,重组蛋白以包涵体形式表达,大小约为38 ku,确定诱导时间4 h、IPTG浓度0.4 mmol/L为最佳诱导条件,Western-blot检测证实纯化的重组蛋白具有良好的反应原性。说明纯化蛋白具有与全病毒相似的生物活性。

• 单位
  动物科技学院; 黑龙江八一农垦大学; 生命科学技术学院