环纹奥斯特线虫PCR-ELISA快速检测方法的建立

作者：李永光; 文育胜; 刘雯雯; 赵涛; 魏芳; 祁光宇^*

来源：甘肃农业大学学报, 2022, 57(05): 138-146.

DOI：10.13432/j.cnki.jgsau.2022.05.016

• 环纹奥斯特线虫
• PCR
• PCR-ELISA

【目的】建立高效、快速、灵敏、特异、准确的环纹奥斯特线虫检测方法。【方法】根据GenBank已发表的奥斯特线虫ITS-2的基因序列，对该上下游引物的5′端分别标记地高辛和生物素，按照PCR-ELISA的操作步骤对所用链霉亲和素的包被浓度、BSA封闭液的封闭浓度、PCR产物的作用时间、酶标二抗的工作稀释浓度以及作用时间、显色时间等进行优化，进而确定反应的最佳条件；以环纹奥斯特线虫、东方毛圆线虫、捻转血矛线虫、羊仰口线虫、甘肃食道口线虫的DNA为模板，在最佳反应条件下进行PCR-ELISA检测其特异性；批内和批间重复性试验检测其稳定性。【结果】建立的环纹奥斯特线虫PCR-ELISA快速检测方法的敏感性比常规PCR高10倍，和其他线虫无交叉反应，特异性强，变异系数小于10%，稳定性好。【结论】建立的高效、快速、特异、安全的Ostertagia circumcincta间隔区ITS-2检测方法，可以为进一步研制用于Ostertagia circumcincta的流行病学调查、诊断试剂提供技术支撑。

• 单位
  甘肃农业大学; 甘肃省定西市临洮农业学校; 中农威特生物科技股份有限公司