番茄GSNOR互作蛋白的筛选与鉴定

作者：郭兆来; 乔圣泰; 李昆志; 徐慧妮^*

来源：昆明理工大学学报(自然科学版), 2021, 46(01): 95-101.

DOI：10.16112/j.cnki.53-1223/n.2021.01.251

• 番茄
• GSNOR
• 蛋白互作
• 酵母双杂交

前期研究表明番茄S-亚硝基谷胱甘肽还原酶(GSNOR)基因参与硝酸盐胁迫应答,但其作用机理尚不清楚.本研究构建诱饵载体pGBKT7-GSNOR,将其转化至酵母感受态细胞Y2HGold中,结果显示重组质粒无自激活活性.利用酵母双杂交技术从拟南芥cDNA文库中筛选GSNOR的互作蛋白,对300个样品测序后通过NCBI BLAST进行分析,其中有260个获得基因号,占总数的92.9%.通过TAIR网站查找基因号对应的蛋白序列,得到了105个蛋白.利用Blast2GO进行GeneOntology注释显示互作蛋白参与4个生物进程,11个细胞组分,4个分子功能过程.对得到的可能互作蛋白随机挑选了5个进行互作蛋白的分离和回复验证,结果发现,随机挑选的这些蛋白的菌落在营养缺陷型的平板上能够正常生长,从而验证了这些蛋白均为GSNOR的互作蛋白.此次酵母双杂交文库的成功筛选为进一步研究番茄GSNOR的分子作用机制奠定了基础.

• 单位
  昆明理工大学