脑心肌炎病毒VP2基因真核表达质粒的构建

作者：张海霞; 王兴陇; **; 李倩; 韩玉梅; 赵克学; 梁浩勤; 邓盈盈; 李向茸; 李琼毅; 冯若飞

来源：中国生物制品学杂志, 2019, 32(02): 139-143.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.002461

• 脑心肌炎病毒
• VP2基因
• 基因重组
• 真核表达
• CHO细胞

目的构建脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)VP2基因真核表达质粒,并于CHO细胞中表达。方法 RT-PCR法扩增EMCV VP2目的基因,克隆至载体pcDNA3. 1中,构建重组质粒pcDNA3. 1-VP2,脂质体法转染CHO细胞。转染48 h后,RT-PCR法检测EMCV VP2基因mRNA的转录情况,免疫组化法及Western blot法检测EMCV VP2蛋白的表达情况。结果经双酶切及测序鉴定,重组质粒pcDNA3. 1-VP2构建正确。EMCV VP2基因m RNA及蛋白可在CHO细胞中正常转录及表达,且EMCV VP2蛋白可与兔抗EMCV阳性血清发生特异性结合,主要分布于CHO细胞膜上。结论成功构建了重组质粒pcDNA3. 1-VP2,并有效地在CHO细胞中进行了表达,为EMCV VP2基因体外表达及其功能的进一步研究奠定了基础。

• 单位
  兰州民海生物工程有限公司; 甘肃省动物细胞工程技术研究中心; 西北民族大学