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摘要
葱鳞葡萄胞菌引起的韭菜灰霉病是影响韭菜产量和品质的主要因素之一。为了筛选出感染灰霉病后韭菜叶片中稳定表达的内参基因用于基因定量表达分析，以模拟接种和接种葱鳞葡萄孢菌24、48、72 h的韭菜叶片为材料，基于前期的转录组测序结果选取UBC1、UBC2、UBQ1、UBQ2、GAPDH3、GAPDH4、TUB、EF-1α、40S RP、DDX、eIF-1A、PABP和DnaJ共13个基因为候选内参基因，利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测13个基因的表达情况，采用geNorm、NormFinder、BestKeeper软件和Reffinder在线程序对候选内参基因的表达稳定性进行评估。结果表明，13个候选内参基因中UBQ1的Ct值变化范围最小，表达水平最稳定。GeNorm、NormFinder和BestKeeper软件筛选出的最佳内参基因不同，RefFinder综合评估显示，UBC2和UBQ1是韭菜叶片接种葱鳞葡萄孢菌后表达稳定性较好的基因，DDX是稳定性较差的基因。为了验证所筛选内参基因的可靠性，选择6个稳定性不同的候选内参基因分别作为定量分析的内部参照，对接种葱鳞葡萄孢菌后不同时间韭菜叶片中GST676和PRP902基因的表达水平进行归一化处理。结果显示，以稳定性较高的UBC2或UBQ1为内参基因时，校正的GST676和PRP902基因的表达趋势与转录组测序结果一致，而以稳定性相对较差的40S RP、eIF-1A、GAPDH4或DDX为内参基因时，校正的目的基因的表达趋势与转录组测序结果稍有差异。软件分析和实验验证结果表明，UBC2和UBQ1基因可作为葱鳞葡萄孢菌侵染韭菜叶片后相关基因定量表达分析的最合适内参基因。研究结果为后续开展韭菜抗灰霉病关键基因表达分析和功能研究奠定了基础。
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单位河南科技大学; 平顶山学院; 河南城建学院
