上海2株严重急性呼吸综合征冠状病毒2的分离与鉴定

作者：彭浩然; 李成忠; 唐海琳; 薛建亚; 陈志辉; 梁雪松; 朱咏梅; 夏炳辉; 朱勇喆; 吴俊杰; 赵兰娟; 任浩; 江亮亮; 何燕华; 戚中田^*; 赵平^*

来源：第二军医大学学报, 2020, 41(04): 365-370.

DOI：10.16781/j.0258-879x.2020.04.0365

• 严重急性呼吸综合征冠状病毒2
• 新型冠状病毒肺炎
• 鼻拭子
• 咽拭子
• 病毒分离

目的从新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者鼻/咽拭子样本中分离、培养严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)。方法将来自上海市COVID-19患者的3份鼻/咽拭子样本以TPCK胰酶处理,然后接种Vero E6细胞;待大部分细胞出现明显病变时,取细胞培养上清用qRT-PCR法检测病毒核酸,并用反转录PCR扩增病毒受体结合区(RBD)基因片段;将病毒扩增培养后感染接种于96孔板中的Vero E6细胞,观察细胞病变效应,并用免疫荧光法检测病毒蛋白。结果 2份COVID-19患者鼻/咽拭子样本接种的Vero E6细胞出现明显细胞病变效应,细胞培养上清中检测出新复制产生的SARS-CoV-2核酸,扩增出的RBD序列与早期分离出的SARS-CoV-2相应序列完全一致;病毒感染的Vero E6细胞病变迅速,并能与SARS-CoV-2核衣壳蛋白(N蛋白)单克隆抗体、刺突蛋白(S蛋白)单克隆抗体及COVID-19患者恢复期血清发生反应。结论从2份COVID-19患者鼻/咽拭子样本中成功分离出SARS-CoV-2,为后续开展SARS-CoV-2感染与致病机制研究、防治药物与疫苗的研发奠定了基础。

• 单位
  中国人民解放军第二军医大学; 长海医院