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摘要
为研究波形蛋白(vimentin)对H9N2亚型禽流感病毒(AIV)复制的影响，构建了真核表达载体FLAG-vimentin,并采用Western blot技术验证FLAG-vimentin重组载体和病毒NP蛋白的表达情况，用荧光定量PCR技术检测病毒HA基因水平。同时，设计合成siRNA,敲低内源性vimentin,检测其对病毒HA基因表达水平的影响。构建原核表达载pCold I-vimentin,蛋白纯化后孵育细胞，采用Western blot、荧光定量PCR技术检测病毒的蛋白表达和基因水平的变化。结果证实，H9N2亚型AIV感染FLAG-vimentin重组载体转染的Hela细胞12 h时，病毒NP蛋白表达减少；而在感染24和36 h时，病毒NP蛋白表达上升。荧光定量PCR结果亦显示，在AIV感染后12 h时，HA基因表达水平明显降低。siRNA敲低Hela细胞内源性vimentin后，H9N2亚型AIV的HA基因表达水平在病毒感染12 h时明显升高，24 h时差异较小，36 h时有所升高。纯化后的vimentin重组蛋白孵育细胞，在病毒感染36 h时，H9N2亚型AIV的NP蛋白表达显著被抑制。荧光定量PCR结果亦证实病毒HA基因在AIV感染后36 h时表达水平明显降低。上述结果表明，H9N2亚型AIV在人源Hela细胞上的早期复制中，vimentin能起到一定程度上的抑制作用，且其重组表达蛋白孵育细胞能够阻断H9N2亚型AIV对细胞的感染，为深入研究vimentin抗病毒复制的机制提供了重要的试验依据，同时为开展抗H9N2亚型AIV的药物研发提供了参考。
