P2X7受体在RGC-5的表达及有效下调P2X7基因的siRNA序列筛选

作者：黄永霞; 方敏; 侯飞; 胡慧玲^*

来源：中国医师杂志, 2018, 20(12): 1782-1786.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1008-1372.2018.12.006

• 受体,嘌呤能P2X7
• 视网膜神经节细胞
• RNA,小分子干扰
• 体外研究

目的检测嘌呤受体P2X7信使RNA(mRNA)及其蛋白在RGC-5细胞系的表达。设计合成针对P2X7受体的小型干扰RNA(siRNA),并筛选出其中能高效抑制其表达的序列。方法采用RT-PCR、Western blot及免疫荧光检测P2X7受体mRNA及蛋白在RGC-5细胞系中的表达情况,并与小鼠视网膜及其他组织进行比较。设计针对P2X7受体的3对干扰序列(P2X7-siRNA-1～3),使用riboFECT?CP转染RGC-5细胞,60 h后检测细胞中P2X7受体mRNA及蛋白表达变化。结果 RGC-5细胞系与小鼠视网膜组织均能检测到P2X7受体mRNA及蛋白的表达,且该受体主要表达于RGC-5的细胞核和细胞质。P2X7-siRNA-3可同时有效下调P2X7的mRNA和蛋白的表达。结论 RGC-5可作为体外研究P2X7受体作用的细胞模型。成功筛选出的针对P2X7受体基因的siRNA将为后续下调该受体、减轻青光眼性视神经病变的基因治疗奠定基础。

• 单位
  暨南大学; 深圳市眼科医院; 暨南大学附属深圳眼科医院