摘要
目的观察幽门螺杆菌感染人胃上皮细胞后自噬的发生及变化情况,并探索上调幽门螺杆菌感染后人胃上皮细胞GES-1自噬反应对细胞是否具有一定的保护作用,为进一步研究幽门螺杆菌感染与细胞自噬奠定基础。方法使用一定浓度的幽门螺杆菌感染人胃上皮细胞GES-1,通过Western blot检测感染不同时间点GES-1中微管相关蛋白轻链3Ⅰ/Ⅱ(LC3Ⅰ/Ⅱ)的转换与Beclin 1的表达,免疫荧光染色观察自噬体的出现。确定Xestospongin B处理人胃上皮细胞GES-1的浓度后,将培养细胞分为三组:幽门螺杆菌感染组、幽门螺杆菌感染+Xestospongin B组、正常培养组。首先确定诱导剂对感染后自噬的上调作用,然后使用微毛细管式细胞分析仪检测细胞凋亡和活性,比较三组细胞存活以及凋亡的差异。结果在GES-1细胞被感染后2 h即可观察到自噬的发生,且呈时间依赖性,于8 h到达高峰,24 h开始恢复基础水平。加诱导后细胞自噬水平上调。单纯感染组细胞活性先迅速降低,2 h之后细胞活性平稳降低,凋亡率逐渐增加。加诱导剂组细胞活性在感染后的6 h内细胞活性稍有降低,6 h后细胞活性开始增加,凋亡率降低。结论幽门螺杆菌能够诱导人胃上皮GES-1发生自噬,Xestospongin B能够上调幽门螺杆菌感染后人胃上皮细胞GES-1的自噬水平,并且上调自噬反应能够对幽门螺杆菌感染的人胃上皮细胞GES-1起到一定保护作用。
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单位成都市妇女儿童中心医院; 四川大学华西第二医院