星点设计-效应面法优化复合酶解酪蛋白制备抗凝血肽的工艺研究

作者：吴雄; 夏建开; 苗艳丽^*; 陈绍红; 张兆霞; 郭婉婷; 李棂灵

来源：药学研究, 2019, 38(06): 336-342.

DOI：10.13506/j.cnki.jpr.2019.06.007

• 星点设计-效应面法
• 酪蛋白
• 复合酶解
• 抗凝血肽
• 体外溶栓

目的本文利用星点设计-效应面法优化复合酶解酪蛋白制备抗凝血肽的工艺条件,并测定其体外抗凝血活性与溶栓效果。方法首先运用星点设计-效应面法来确定菠萝蛋白酶、胰蛋白酶、胰糜蛋白酶和木瓜蛋白酶这4种酶各自酶解酪蛋白的最佳反应条件,然后在各酶的最佳反应条件下对酪蛋白进行复合酶解,制得酪蛋白复合酶解液,再运用凝血酶滴定改进法来测定其体外抗凝血活性,并用抗凝血活性最高的酪蛋白复合酶解液进行体外溶栓实验。结果 4种酶酶解酪蛋白的最佳反应条件分别如下:菠萝蛋白酶:pH为6.50、温度为60.00℃、酶用量为12000.00 U/(g底物)、时间为3.00 h、料水比为1∶7(m/V);胰蛋白酶和胰糜蛋白酶均为:pH为8.00、温度为50.00℃、酶用量为6000.00 U/(g底物)、时间为3.00 h、料水比为1∶7(m/V);木瓜蛋白酶:pH为6.50、温度为60.00℃、酶用量为4000.00 U/(g底物)、时间为3.00 h、料水比为1∶7(m/V)。结论本实验条件下,加酶组合为"菠萝蛋白酶-胰蛋白酶-胰糜蛋白酶-木瓜蛋白酶"的复合酶解制备的酪蛋白酶解液具有最高的体外抗凝血活性,为100.0 ATU·mL-1;新西兰大白兔的血栓线用100.0 ATU·mL-1的酶解液浸泡24 h后全部溶解,且兔血与100.0 ATU·mL-1酪蛋白酶解液的比例(V/V)为1∶1和4∶6的样品组放置48 h仍不凝固。

• 单位
  广东海洋大学