霍乱毒素B亚单位与胰岛素原融合基因的克隆、表达及重组蛋白特性分析

作者：陈丽; 欧阳凤秀; 钱炳俊; 任宏; 王强; 姜庆五; 王玉炯; 刘静波; 梁婉琪; 张大兵

来源：生物工程学报, 2005, (02): 204-210.

DOI：10.3321/j.issn:1000-3061.2005.02.007

• 霍乱毒素B亚单位
• 胰岛素原
• 融合基因CTBPROIN
• 神经节苷脂GM1

构建了霍乱毒素B亚单位 (CholeratoxinBsubunit,CTB)与胰岛素原 (Proinsulin)的融合基因CTB -PROIN ,将该融合基因克隆到大肠杆菌表达载体pET 30a(+)中 ,获得重组质粒pETCPI,并将该质粒转入大肠杆菌菌株BL2 1(DE3)中 ;重组菌株经IPTG诱导后 ,其表达产物经过 15 %SDS PAGE分析表明该菌株可以表达融合蛋白 ,其分子量约为 2 1. 6kD ,且主要以包涵体形式存在 ,约占全菌蛋白的 2 5 %。含CTB- PROIN重组蛋白的包涵体经过变性和复性后 ,CTB- PROIN可以在体外自组装成五聚体结构。Westernblotting分析结果表明重组CTB PROIN蛋白可分别被霍乱毒素的抗体和胰岛素的抗体识别 ,说明该蛋白具有霍乱毒素和胰岛素的双重抗原性。同时在体外 ,CTB PROIN蛋白可与神经节苷脂GM1(monosialoganglioside)特异性结合 ,表明了该融合蛋白在体外具有生物活性。这些研究结果为利用原核生物表达系统研制廉价、高效的I型糖尿病口服疫苗奠定了基础。

• 单位
  复旦大学; 生命科学学院; 宁夏大学; 南京大学; 上海市农业科学院