脂多糖促进肠道L细胞 miR-425-5p表达的机制研究

作者：韦丽瑞; 赵雪楠; 陈东东; 丁成智; 郭丰; 刘彦玲; 王娇^*

来源：中华糖尿病杂志, 2022, 14(08): 817-822.

• 脂多糖类
• NF-κB
• miR-425-5p
• 胰高糖素样肽-1

目的探讨脂多糖(LPS)促进肠道L细胞miR-425-5p表达的机制。方法将肠道L细胞系GLUTag细胞分为对照(NC)组、LPS组(LPS 200 ng/ml培养24 h)、小干扰RNA(siRNA)NC组(LPS 200 ng/ml培养24 h后转染siRNA NC)和NF-κB siRNA组[LPS 200 ng/ml培养24 h后转染核因子-κB(NF-κB)siRNA], 每组3个复孔。采用Western blotting检测细胞核及细胞质中NF-κB p65蛋白表达水平, 实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-425-5p表达水平, 酶联免疫吸附测定法检测胰高糖素样肽-1(GLP-1)的分泌水平。采用Promo软件分析预测miR-425-5p启动子上NF-κB的潜在结合位点, 双荧光素酶报告实验检测miR-425-5p启动子区域结合位点的相对活性, 染色质免疫沉淀反应验证NF-κB与miR-425-5p之间的相互作用。两组之间比较采用独立样本t检验, 多组之间比较采用单因素方差分析。结果与对照组相比, LPS组的GLP-1分泌水平显著下降(P<0.01), miR-425-5p表达水平显著升高(P<0.01)、细胞质和细胞核中NF-κB p65蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。与siRNA NC组相比, NF-κB siRNA组细胞核及细胞质中NF-κB p65的蛋白表达水平、miR-425-5p表达水平均明显下降(P<0.01)。LPS诱导下, 含有两个结合位点(2-Luc/3-Luc)的miR-425-5p启动子活性明显高于含有单独的结合位点(3-Luc), 差异具有统计学意义(P<0.01);NF-κB与miR-425-5p基因启动子序列结合位点2的结合能力最强(P<0.01)。结论 LPS通过活化NF-κB, 促进其与miR-425-5p基因启动子序列的结合位点2结合, 进而促进肠道L细胞miR-425-5p转录, 最终调节肠道L细胞GLP-1分泌。

• 单位
  郑州大学第一附属医院; 河南省胸科医院