轻甲硫氨酸限制对肝癌细胞增殖的影响及其机制

作者：庞春; 方红波; 张嘉凯; 郭文治; 高洁^*

来源：中华实验外科杂志, 2023, 40(06).

• 肝癌
• 甲硫氨酸
• 轻甲硫氨酸限制
• 增殖

目的探讨轻甲硫氨酸限制(10%MR)对肝癌细胞增殖能力的影响及其机制。方法采用对照短发夹RNA(shCtrl)及脂肪酸合酶(FASN)短发夹RNA (shFASN)慢病毒感染HuH7和HepG2, 构建对照组和shFASN组细胞;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、克隆形成分析细胞增殖能力;采用流式细胞仪分析细胞周期变化;采用蛋白质免疫印迹分析增殖细胞核抗原(PCNA)、FASN、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、蛋白激酶B(Akt)和磷酸化蛋白激酶B(pAkt)的蛋白水平;分别采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)、亚硫酸氢盐测序、油红染色和Bodipy染色分析10%MR对FASN的mRNA、FASN的CpG岛甲基化及脂质累积的影响。组间比较采用t检验。结果 10%MR处理组HuH7细胞活性高于对照组(0.666±0.013比0.510±0.007, t=-26.50, P<0.001);处在G2期的细胞比例高于对照组[(19.8±1.3)%比(12.1±1.8)%, t=-5.91, P<0.01];PCNA水平高于对照组(1.280±0.051比0.447±0.067, t=-17.07, P<0.001);mTOR蛋白表达高于对照组(1.161±0.277比0.478±0.061, t=-4.17, P<0.05);pAkt水平高于对照组(0.938±0.194比0.357±0.169, t=-3.90, P<0.05);FASN的CpG岛甲基化水平低于对照组(0.233±0.252比0.833±0.153, t=3.53, P<0.05);FASN的mRNA高于对照组(1.360±0.137比1.003±0.081, t=-4.49, P<0.01);FASN的蛋白高于对照组(0.915±0.118比0.648±0.034, t=-3.76, P<0.05)。ShFASN组HuH7细胞活性低于对照组(0.303±0.019比0.414±0.018, t=10.25, P<0.001);G2期的细胞比例低于对照组[(3.5±1.4)%比(7.6±1.4)%, t=3.69, P<0.05];mTOR蛋白水平低于对照组(0.276±0.079比0.646±0.068, t=6.17, P<0.01);pAkt水平低于对照组(0.296±0.016比0.494±0.051, t=6.37, P<0.01)。10%MR处理的shFASN组HuH7细胞活性低于10%MR处理的shCtrl组(0.369±0.003比0.495±0.007, t=41.06, P<0.001);G2期的细胞比例低于10%MR处理的shCtrl组[(11.1±0.4)%比(19.4±2.8)%, t=5.05, P<0.01];mTOR蛋白水平低于10%MR处理的shCtrl组(0.419±0.187比0.939±0.072, t=4.49, P<0.05);pAkt水平低于10%MR处理的shCtrl组(0.421±0.060比0.623±0.060, t=4.11, P<0.05)。结论轻甲硫氨酸限制通过上调FASN的表达, 加速细胞周期, 进而促进肝癌细胞增殖。

• 单位
  郑州大学第一附属医院