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摘要
在植物分子细胞生物学研究中，基于植物根尖的免疫染色常用于研究细胞内靶蛋白的定位、相对表达和激活状态。然而，在一些园艺作物和小染色体植物中，免疫染色依然是个技术性难题。黄瓜作为重要的园艺作物，其免疫染色相关研究相对滞后，为此，本研究以黄瓜‘长春密刺’（Cucumis sativus ’CCMC’）植物根尖为研究材料，研究染色体制片过程中根尖取材的长度、预处理试剂和处理时间、固定时间及其他相关因素对免疫染色制片效果的影响，从而对黄瓜根尖染色体进行了适于免疫荧光染色的染色体制片技术的改进和优化，并利用抗CENH3抗体对制片进行了检验，以评价免疫染色制片的效果。结果表明：当根尖长至0.5～1.0 cm时取样，并使用8-羟基喹啉溶液预处理1.5～2 h，能观察到较多中期分裂相，染色体浓缩程度适宜；4%多聚甲醛固定15～25 min，染色体形态清晰，制片效果较好；实验过程中，若不能及时进行免疫染色实验，可在压片后将染色体制片储存于-80 ℃冰箱备用，至少能储存9 d。最后，本研究使用黄瓜抗CENH3抗体检测制片效果，免疫荧光染色后可观察到较强的信号。本试验可为黄瓜细胞遗传学进一步研究提供参考。
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单位作物遗传与种质创新国家重点实验室; 南京农业大学
