映山红花总黄酮减轻缺血性脑损伤的作用机制

作者：姜晨晨; 施磊; 赵欣雅; 张慧; 李子旭; 陆嘉珺; 赫玉香; 曹迪; 胡浩然; 韩军^*

来源：中国中药杂志, 2023, 48(02): 455-464.

DOI：10.19540/j.cnki.cjcmm.20221010.402

• 脑缺血再灌注损伤
• 映山红花总黄酮
• SOCE通路
• STIM-ORAI

研究映山红花总黄酮(total flavonoids of Rhododendra simsii, TFR)对大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)模型大鼠脑损伤和PC12细胞氧糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation, OGD/R)损伤的作用，并探讨其潜在的作用机制。采用MCAO法建立大鼠局灶性缺血脑损伤模型，将雄性SD大鼠随机分成假手术组、模型组、TFR用药组，MCAO处理后连续用药TFR(60 mg·kg-1)3 d。ELISA检测血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的含量；HE和TTC染色法分别观察脑组织的病理变化和脑梗死情况；RT-qPCR和Western blot分别检测脑组织中钙释放激活钙通道调节分子1(calcium release-activated calcium channel modulator 1,ORAI1)、基质相互作用分子1(stromal interaction molecule 1,STIM1)、基质相互作用分子2(STIM2)、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,caspase-3)mRNA水平及蛋白含量。建立PC12细胞OGD/R损伤模型，随机分为正常组、模型组、基因沉默组、TFR(30μg·mL-1)组、TFR(30μg·mL-1)+基因过表达质粒组。运用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪分别检测PC12细胞内Ca2+浓度和细胞凋亡率；基因沉默和基因过表达技术观察STIM-ORAI调控的钙库操纵性钙内流(store-operated calcium entry, SOCE)通路对TFR作用的影响。结果显示，TFR连续用药3 d后可显著减轻MCAO大鼠脑组织病理学损伤，降低血清中TNF-α、IL-1、IL-6的含量，下调MCAO大鼠脑组织中ORAI1、STIM1、STIM2、caspase-3基因表达水平，上调PKB基因表达；TFR可显著降低OGD/R诱导的PC12细胞内Ca2+超载和细胞凋亡。而沉默ORAI1、STIM1、STIM2基因可产生类似TFR的作用。过表达这些基因，可以显著阻断TFR降低PC12细胞Ca2+超载和凋亡的作用。结果表明，在局灶性脑缺血再灌注损伤早期和OGD/R诱导的PC12细胞损伤中，TFR减轻缺血性脑损伤的作用可能与其抑制STIM-ORAI调控的SOCE通路，降低Ca2+超载，减少炎症因子表达和细胞凋亡有关。

• 单位
  皖南医学院; 国家中医药管理局