多重耐药维氏气单胞菌porin基因敲除的构建及其耐药特性研究

作者：王晓磊; 刘兆平; 李子雁; 周厚宇; 张开; 温际富; 宋一晓; 刘云国; 隋智海^*

来源：食品安全质量检测学报, 2023, 14(09): 34-42.

DOI：10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.2023.09.007

• 维氏气单胞菌
• porin基因
• 同源重组
• 基因敲除
• 耐药性

目的 研究微孔蛋白基因porin对维氏气单胞菌(Aeromonas veronii,A. veronii)耐药性的影响以解析A. veronii的耐药机制。方法 以多重耐药的A. veroniiWL-3为研究对象,采用同源重组双交换的方法构建Δporin敲除株,利用比浊法测定其生长曲线,通过药敏纸片法分析其耐药性。结果 以A. veronii WL-3基因组DNA为模板,利用overlap聚合酶链式反应技术扩增获得上下同源臂融合片段,并连接至自杀质粒pDM4中,重组成敲除质粒pDM4-Δporin。将pDM4-Δporin转化至感受态大肠杆菌SM10中,通过接合转移转入A. veronii WL-3中。通过同源重组双交换构建A. veronii WL-3Δporin敲除株。生长曲线显示与野生株相比,Δporin菌株的生长速度并无明显变化;抗生素耐药特征分析显示敲除porin基因会降低A. veronii对头孢氨苄、新霉素、四环素、环丙沙星等10种抗生素的敏感性,提高对多粘菌素B的敏感性。结论 基因porin不是A. veronii生长所必需的,但会影响A. veronii对部分抗生素的敏感度。本研究所构建的敲除株可为深入研究porin在A. veronii的耐药机制提供必要材料。

• 单位
  临沂大学; 生命科学学院