HBV临床分离株复制型质粒的构建与鉴定

作者：李瑞明; 杨燕; 刘莉; 万松; 贺昱霖; 孟忠吉

来源：肝脏, 2015, 20(07): 529-532.

DOI：10.14000/j.cnki.issn.1008-1704.2015.07.008

• 乙型肝炎病毒
• 临床分离株
• 重组体

目的克隆HBV临床分离株全长基因组,构建真核表达复制载体,为研究HBV的耐药机制提供基础。方法从乙型肝炎患者血清中提取HBV DNA,PCR扩增HBV全长基因组,经SapI酶切后,克隆入pHY106载体,测序分析序列,然后用lipofectamine 2000将重组载体转染Huh7细胞,3 d后收集培养上清液,ELISA检测HBsAg、HBeAg水平;Real-time PCR检测细胞培养上清液中HBV含量;Southern印迹检测细胞内HBV复制中间体。结果获得5株HBV临床分离株均为野生型,其中基因B型3株,基因C型2株。成功构建5株HBV临床分离株的复制型质粒,在转染Huh7细胞的上清液中检测到HBsAg、HBeAg及HBV DNA,细胞内检测到HBV复制中间体。结论成功克隆并构建了HBV临床分离株复制型质粒,这种复制型质粒将在HBV临床分离株的耐药机制和药物敏感性等方面研究中发挥重要作用。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属同济医院; 十堰市太和医院