貉细小病毒的原核表达及病毒样颗粒的制备

作者：雷欢; 李希辰; 孙博; 吴丛梅; 殷玉和^*

来源：黑龙江畜牧兽医, 2020, (11): 104-109.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2019.06.0410

• 貉细小病毒
• 衣壳蛋白VP2
• 原核表达
• 分子伴侣
• 病毒样颗粒
• 可溶性表达

为了利用大肠杆菌系统可溶性表达貉细小病毒(Raccoon dog parvovirus,RDPV)的衣壳蛋白VP2,获得RDPV病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),试验首先通过密码子优化并合成RDPV VP2基因,构建重组表达质粒pET30a-VP2,转化至E.coli ER2566感受态细胞中;SDS-PAGE电泳检测目的蛋白RDPV VP2的表达形式;将重组表达质粒pET30a-VP2与分子伴侣质粒pTf16共同转入E.coli ER2566感受态细胞中,并优化最佳诱导表达条件;采用Western-blot技术鉴定目的蛋白的可溶性;经硫酸铵初级纯化后,电镜观察VLPs的形态,并采用血凝试验检测其免疫活性。结果表明:目的蛋白RDPV VP2得到了大量表达,并且大部分以可溶性形式表达,最佳诱导条件为30℃、0.1 mmol/L IPTG和2.0 g/L L-阿拉伯糖;犬细小单克隆抗体可以特异性识别目的蛋白RDPV VP2;30%硫酸铵沉淀初级纯化后,电镜观察可见到均一的、大小为24 nm左右的RDPV VLPs,其形态学结构与天然RDPV VLPs形态相似,血凝效价为223。说明分子伴侣可有效提高目的蛋白RDPV VP2的可溶性表达量,并成功制备出RDPV VLPs。

• 单位
  生命科学学院; 长春工业大学; 吉林大学