菊芋叶绿体分离方法比较研究

作者：许盼盼; 杨世鹏; 王丽慧; 孙雪梅; 高洁铭; 李莉; 钟启文^*

来源：西北农业学报, 2019, 28(04): 657-663.

DOI：10.7606/j.issn.1004-1389.2019.04.019

• 改良高盐-低pH法
• 叶绿体基因组提取
• 叶绿体分离
• 菊芋

以菊芋叶片为材料,通过比较提取其叶绿体DNA的5种方法(改良高盐-低pH法、Percoll密度梯度离心法、GENMED试剂盒物理法、GENMED试剂盒化学法及DNaseⅠ差速离心分离法),筛选出适合菊芋叶绿体NDA的提取方法。利用显微镜、核酸蛋白测定仪、琼脂糖凝胶电泳及菊芋基因特异引物RAPD检测。结果显示:改良高盐-低pH法分离得到的叶绿体在40×物镜下其数目多,浓度高,背景清晰,提取菊芋叶片cpDNA的OD260/OD280为1.926,质量浓度为295.63μg/μL。经10 g/L琼脂糖凝胶电泳检测发现,cpDNA条带清晰整齐,无核DNA污染;且提取的cpDNA通过4对引物均能扩增到片段。结果表明,改良高盐-低pH法能够快速获得菊芋高质量的叶绿体DNA。

• 单位
  青海大学农牧学院; 青海大学; 青海省蔬菜遗传与生理重点实验室