猪δ冠状病毒RBD蛋白多肽抗体的制备与鉴定

作者：张国庆; 姜宇航; 张爽; 李乐天; 郝嘉翼; 陈竞; 邹万成; 李昌; 李太元^*; 高旭^*; 金宁一^*

来源：中国畜牧兽医, 2023, 50(04): 1575-1583.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2023.04.029

• 猪δ冠状病毒(PDCoV)
• 受体结合结构域(RBD)
• 抗原表位
• 多肽抗体

【目的】设计合成猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus, PDCoV)受体结合结构域(receptor binding domain, RBD)的抗原表位，制备并鉴定多克隆抗体。【方法】为了特异性检测PDCoV RBD抗原，应用生物信息学技术预测其潜在抗原表位，将表位氨基酸序列与δ冠状病毒属中的其他15株病毒株以及14株其他猪冠状病毒株进行相似性比对，将筛选的优势抗原表位与载体蛋白血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin, KLH)偶联，合成多肽并免疫小鼠，制备PDCoV RBD特异性抗体。通过Western blotting试验对不同系统表达的PDCoV RBD以及PDCoV、TGEV和PEDV感染ST细胞表达的S蛋白进行鉴定，通过间接ELISA方法测定抗体效价。【结果】经序列比对，利用生物信息学技术预测合成的表位抗原与δ冠状病毒属中的其他15株病毒株(0～14.28%)以及14株其他猪冠状病毒株(0～7.14%)序列相似性非常低，具有良好的保守性；Western blotting结果显示，制备的多肽抗体1∶500、1∶1 000、1∶2 000倍比稀释后均能特异性识别转染pcDNA3.1-PDR-Strep的Expi293F表达的PDCoV RBD蛋白、杆状病毒感染SF9细胞表达的PDCoV RBD蛋白，1∶1 000稀释后能够检测到PDCoV感染ST细胞表达的PDCoV S蛋白，而在TGEV和PEDV感染的细胞中未检测到特异性蛋白的表达；ELISA检测抗血清中多肽特异性抗体的效价可以达到1∶12 800。【结论】利用生物信息学技术成功预测PDCoV RBD蛋白抗原表位，免疫后获得的抗体具有较好的特异性。

• 单位
  延边大学; 中国农业科学院