金荞麦黄酮醇合酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

作者：蒋洁; 白悦辰; 李成磊; 陈惠; 吴琦

来源：中草药, 2013, 44(14): 1974-1978.

• 金荞麦
• 黄酮醇合酶
• 基因克隆
• 原核表达
• 序列分析 Fagopyum dibotrys(D.Don) Hara
• flavonol synthase
• gene cloning
• prokaryotic expression
• sequence analysis

目的克隆金荞麦黄酮醇合酶(FdFLS)基因的编码序列,并对该基因进行序列分析、原核表达及其活性研究。方法采用同源克隆技术获得FdFLS基因cDNA序列,并对其进行生物信息学分析;构建FdFLS原核表达载体pET-30b(+)-FdFLS,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并测定目标蛋白的酶学活性。结果 FdFLS基因开放阅读框(ORF)全长1 008 bp,编码334个氨基酸;FdFLS基因在大肠杆菌中可表达出相对分子量约4×104的蛋白,并具有将二氢槲皮素和二氢山柰酚转化为槲皮素和山柰酚的催化活性。结论首次克隆到FdFLS基因,并实现该基因在大肠杆菌中有活性的表达。

• 单位
  四川农业大学