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摘要
目的利用包装制备的重组慢病毒载体感染人脐带间充质干细胞,为后续的细胞重编程奠定基础。方法利用组织块贴壁法分离、培养、扩增出人脐带间充质干细胞(HUMSC)。携带目的基因(oct4、sox2、klf4、c-myc)及绿色荧光蛋白的质粒经验证、扩增后,转染HEK-293T细胞,制备携带上述基因的慢病毒上清液。荧光显微镜下梯度稀释法检测病毒滴度。慢病毒液感染35代生长良好的HUMSC,荧光显微镜及流式细胞术检测病毒感染力,RT-PCR及定量PCR检测目的基因mRNA水平。结果成功验证、扩增携带目的基因的质粒。制备的新鲜病毒液滴度达5×108U/mL,冻存后降为5×106U/ml。重组慢病毒感染HUMSC的感染力高于80%,4种目的基因的表达均明显高于对照。结论重组慢病毒载体可以在体外高效的转染HUMSC,并稳定表达目的基因,是HUMSC重编程的有效基因转移载体。
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