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摘要
目的 探讨微小RNA(miR)-199a-3p调控CD4+T细胞表达，参与肺炎支原体肺炎(MPP)患儿免疫反应及其发病机制。方法 选择2018年1月至2020年12月重庆市第七人民医院收治的500例MPP患儿为研究对象，并将其纳入观察组，将同期在该院进行健康体检的200例儿童纳入对照组。将进行体外试验的THP-1细胞培养后，随机分为miR-199a-3p siRNA组(n=3,转染miR-199a-3p siRNA),miRNA mimic组(n=3,转染miRNA mimic)及未处理组(n=3,等量RPMI 1640完全培养基处理),采用外购肺炎支原体(MP)中提取的脂质相关膜蛋白(LAMP),刺激上述3组THP-1细胞后，进行相关试验。采用独立样本t检验，对观察组及对照组受试儿的外周血单核细胞中miR-199a-3p/U6、CD4+T细胞比例，以及血清白细胞介素(IL)-6、IL-17、IL-23及粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)水平进行统计学比较。采用单因素方差分析及LSD-t检验，对3组THP-1细胞中IL-6、IL-17、IL-23及GM-CSF表达水平进行总体及两两比较。采用Pearson相关性分析法，对LAMP刺激后THP-1细胞中CD4+T细胞表达水平与miR-199a-3p表达水平的相关性进行分析。本研究经重庆市第七人民医院伦理委员会批准(审批文号：LLH201708-02)。所有受试儿监护人对本研究均知情同意，并签署知情同意书。结果 (1)观察组患儿外周血单核细胞中miR-199a-3p/U6为0.55±0.12,低于对照组的0.87±0.09;外周血单核细胞中CD4+T细胞比例，以及血清IL-6、IL-17、IL-23及GM-CSF水平分别为(14.4±3.8)%、(0.52±0.08) ng/L、(36.2±5.1) ng/L、(2.89±0.21) ng/mL、(273.8±30.2) mg/L,均分别高于对照组的(6.7±2.0)%、(0.41±0.09) ng/L、(23.9±5.9) ng/L、(1.56±0.14) ng/mL、(163.3±13.8) mg/L,并且上述差异均有统计学意义(t=38.44、34.30、9.29、15.56、44.23、66.24,均为P<0.001)。(2)LAMP刺激后，miRNA mimic组THP-1细胞中IL-6、IL-17、IL-23及GM-CSF表达水平，均分别高于miR-199a-3p siRNA组及未处理组，并且差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)LAMP刺激后，THP-1细胞中CD4+T细胞相对表达水平与miR-199a-3p相对表达水平呈负相关关系(r=—0.643,P=0.003)。结论 miR-199a-3p可能通过调控CD4+T细胞的表达，参与MPP患儿免疫反应。
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单位重庆市第七人民医院; 重庆医科大学附属第二医院
