连接蛋白43通过蛋白激酶A介导丝氨酸373调控脓毒症急性肺损伤肺泡Ⅱ型上皮细胞屏障功能的研究

作者：赵希伟; 周佳伟; 刘凯; 侯林义; 张文凯^*

来源：中华危重症医学杂志(电子版), 2021, 14(05): 355-361.

• 脓毒症
• 急性肺损伤
• 蛋白激酶A
• 连接蛋白43
• 肺泡Ⅱ型上皮细胞

目的观察脓毒症急性肺损伤肺泡Ⅱ型上皮细胞中连接蛋白43(Cx43)表达水平与肺泡气血屏障通透性的关系,并探讨Cx43及蛋白激酶A(PKA)信号通路在脓毒症急性肺损伤中的作用。方法将A549细胞分为对照组、脓毒症组[脂多糖(LPS)组]、LPS+PKA抑制剂组(LPS+H89组)和8-Bromo-cAMP组(PKA激活剂组)。LPS组和LPS+H89组加入LPS 1μg/mL,PKA激活剂组加入8-Bromo-cAMP 10μmol/L,均处理24 h;其中,LPS+H89组予H89 10μmol/L预处理1 h后弃去。采用Western-blotting法检测各组细胞磷酸化Cx43(p-Cx43)、PKA及磷酸化PKA(p-PKA)的蛋白表达水平,并用Transwell板进行单层细胞培养,用酶标仪测定A549单层细胞的通透性。结果 4组细胞p-Cx43、PKA和p-PKA蛋白表达水平及细胞通透性比较,差异均有统计学意义(F=8.961、249.729、7 526.430、3 661.755,P均<0.05)。进一步两两比较发现,LPS组和PKA激活剂组p-Cx43和PKA蛋白表达水平及细胞通透性均较对照组显著升高,LPS组、LPS+H89组和PKA激活剂组p-PKA蛋白表达水平均较对照组显著升高;LPS+H89组p-Cx43和PKA蛋白表达水平及细胞通透性均较LPS组降低,p-PKA则较LPS组有所升高;PKA激活剂组较LPS组和LPS+H89组细胞通透性均显著增大(P均<0.05)。结论 Cx43通过PKA介导丝氨酸373调控在脓毒症引起的急性肺损伤中起着关键作用,其可增加肺泡Ⅱ型上皮细胞的通透性,破坏肺泡屏障功能及增加缝隙连接细胞间通讯。

• 单位
  湖北省人民医院; 山西医科大学第二医院