质粒电穿孔Jurkat细胞递送CRISPR/Cas9系统的优化

作者：赵日; 蒙露; 冯建琼; 刘攀; 家婷; 郑武燕; 张悦; 刘佳慧; 张涛; 邹强; 李华^*

来源：中国细胞生物学学报, 2019, 41(04): 702-709.

• CRISPR/Cas9
• 电穿孔
• 基因编辑
• 优化
• CAR-T

CRISPR/Cas9是一种应用广泛的高效基因编辑技术。运用CRISPR/Cas9对T细胞进行基因修饰能增强T细胞的特异性免疫应答能力,在过继性肿瘤免疫T细胞治疗中具有巨大应用前景。CRISPR/Cas9的递送途径及效率影响着其基因编辑的效率。电穿孔是一种安全、简单、经济、高效、适用范围广和重复性好的转染方法,可用来高效递送CRISPR/Cas9系统。本研究以常用的T淋巴细胞系癌细胞Jurkat细胞为T细胞模型材料,利用绿色荧光蛋白基因质粒观测转染效率,探索质粒电穿孔Jurkat细胞的最优体系,进一步采用该优化体系成功递送CRISPR/Cas9系统进入Jurkat细胞,高效地敲除目的β2M基因,使之成为HLA-I-Jurkat细胞。该研究提供了适用于质粒CRISPR/Cas9系统电穿孔T细胞的优化系统,为后续将CRISPR/Cas9基因编辑系统运用于过继性T细胞肿瘤治疗奠定了基础。

• 单位
  成都医学院; 西南交通大学; 川北医学院; 成都中医药大学