高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法分析人血清中的硒形态

作者：姚晓慧; 陈绍占; 刘丽萍^*; 刘洋; 李乾玉

来源：质谱学报, 2022, 43(03): 381-388.

• 高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱(HPLC-ICP-MS)
• 血清
• 硒形态
• 蛋白酶

采用高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱(HPLC-ICP-MS)法分析人血清中的硒酸盐(Se(Ⅵ))、亚硒酸盐(Se(Ⅳ))、硒代胱氨酸(SeCys2)、甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)、硒代蛋氨酸(SeMet)等5种硒形态。血清样品经蛋白酶超声水浴酶解后，ZORBAX SB-Aq C18反相色谱柱(250 mm×4.6 mm×5μm)分离，以10 mmol/L柠檬酸和5 mmol/L己烷磺酸钠(含1%甲醇，pH 4.0)为流动相，等度洗脱。结果表明：10 min内即可实现5种硒形态的有效分离，线性范围为0.0～100.0μg/L,相关系数(r)均大于0.999,检出限在0.05～0.2μg/L之间；对添加3个浓度水平的5种硒形态混合标准溶液进行加标回收实验，正常血清中Se(Ⅳ)的加标回收率在35.1%～39.3%之间，去除大分子蛋白后的人血清中Se(Ⅳ)的加标回收率在87.9%～90.0%之间，正常人血清和去除大分子蛋白后的人血清中SeCys2的加标回收率在57.7%～72.5%之间，Se(Ⅵ)、MeSeCys、SeMet的加标回收率均在80%～120%之间；采用不同浓度水平的测试精密度考察方法的重复性，5种硒形态的相对标准偏差(RSD)均小于5%。人血清中的硒形态主要以硒代胱氨酸为主，其次为硒代蛋氨酸，还有少量的无机硒和未知硒化合物，血清中含有的大分子蛋白可能会与Se(Ⅳ)结合，导致Se(Ⅳ)加标回收率偏低。

• 单位
  食物中毒诊断溯源技术北京市重点实验室; 北京市疾病预防控制中心; 公共卫生学院; 首都医科大学