小鼠精原细胞分选方法改良的研究

作者：李堃; 刘悦; 黄鹏; 杨智昉^*; 胡茜; 张颖; 李志宏; 吕叶辉; 梁乐

来源：中华男科学杂志, 2019, 25(11): 963-970.

DOI：10.13263/j.cnki.nja.2019.11.001

• 精原细胞
• 分化中
• 未分化
• 磁珠分选
• 小鼠

目的:通过特异抗体结合的磁珠分选,改进小鼠未分化和分化中两类精原细胞分选方法。方法:利用Thy1和c-Kit两个特异抗体结合的磁珠分选技术,分别将出生后7 d雄性小鼠睾丸中的Thy1+细胞和c-Kit+细胞分别做为未分化和分化中的精原细胞分选出来,利用免疫荧光技术和流式细胞术,检测两种精原细胞的纯度,利用实时荧光定量PCR检测两种精原细胞中Gfrα1、Plzf、c-kit和sohlh2 mRNA的表达差异来鉴定两种精原细胞,并将Thy1+细胞进行原代细胞培养。结果:Thy1+细胞和c-Kit+细胞的分选纯度分别达到(85.6±8.35)%和(89.40±2.77)%(P<0.01)。Thy1+细胞中Gfrα1和Plzf基因的相对表达量分别可达到c-Kit+细胞的(9.47±1.29)、(4.40±0.59)倍,而在c-Kit+细胞中kit和sohlh2基因的相对表达量分别可达到Thy1+细胞的(7.38±1.07)、(3.88±0.28)倍(P<0.01)。原代培养后,可见细胞状态良好,能够顺利的自我增殖,并具有精原干细胞增殖特征。结论:利用Thy1和c-Kit两个特异抗体结合的磁珠分选技术可以有效地将未分化和分化中的精原细胞分选出来,并将未分化的精原细胞进行体外培养。

• 单位
  上海交通大学; 上海健康医学院; 基础医学院