ALKBH5调控GEFT的m6A修饰对胆管癌转移及EMT的实验研究

作者：王希方; 郑伟; 马东瑞; 何莉; 孙晶莹; 孙杨; 孟莲; 孙超^*

来源：现代检验医学杂志, 2023, 38(04): 1-21.

• 胆管癌
• m6A甲基化
• alKB同源蛋白
• 鸟嘌呤核苷酸交换因子
• 上皮间充质转化

目的 探究alkB同源蛋白5(ALKBH5)调控鸟嘌呤核苷酸交换因子T(guanine nucleotide exchange factors T, GEFT)的m6A修饰对胆管癌转移和上皮间充质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）的影响。方法 将HuCCT1细胞按照转染类别分为Control组，NC-sh组、ALKBH5-sh组、NC-LV组、ALKBH5-LV组、ALKBH5-LV+NC-sh组和ALKBH5-LV+GEFT-sh组。Control组细胞不进行转染，使用Lipofectamine 2000对其他组细胞分别转染相应的慢病毒。采用MTT法检测细胞增殖水平，流式细胞仪检测细胞凋亡水平，Transwell实验检测细胞迁移和侵袭水平。采用RT-qPCR分析HuCCT1细胞中的ALKBH5,GEFT,Bax,Bcl-2,MMP2,MMP9,E-cadherin,N-cadherin和Vimentin的mRNA水平。采用Western blot分析HuCCT1细胞中的ALKBH5和GEFT蛋白水平。采用MeRIP-qPCR分析HuCCT1细胞中GEFT m6A甲基化水平。结果 与Control组和NC-sh组比较，ALKBH5-sh组ALKBH5和GEFT的mRNA和蛋白水平降低，相对细胞活力降低，细胞凋亡率和Bax mRNA水平升高，Bcl-2 mRNA水平降低，迁移和侵袭细胞数量降低，MMP2和MMP9 mRNA水平降低，E-cadherin mRNA水平升高，N-cadherin和Vimentin水平降低，GEFT m6A甲基化水平升高，差异具有统计学意义（F=43.347～1 995.868，均P<0.001）。与Control组和NC-LV组比较，ALKBH5-LV组ALKBH5和GEFT的mRNA和蛋白水平升高，相对细胞活力升高，细胞凋亡率和Bax mRNA水平降低，Bcl-2 mRNA水平升高，迁移和侵袭细胞数量升高，MMP2和MMP9 mRNA水平升高，E-cadherin mRNA水平降低，N-cadherin和Vimentin水平升高，GEFT m6A甲基化水平降低，差异具有统计学意义（F=42.421～720.275，均P<0.001）。与ALKBH5-LV+NC-sh组比较，ALKBH5-LV+GEFT-sh组GEFT的mRNA和蛋白水平降低，相对细胞活力降低，细胞凋亡率和Bax mRNA水平升高，Bcl-2 mRNA水平降低，迁移和侵袭细胞数量降低，MMP2和MMP9mRNA水平降低，E-cadherin mRNA水平升高，N-cadherin和Vimentin水平降低，差异具有统计学意义（t=7.175～77.872，均P<0.001）。结论 ALKBH5和GEFT均促进胆管癌细胞的生长和转移，ALKBH5可能通过调控GEFT m6A甲基化修饰来影响胆管癌的转移及EMT。

• 单位
  中心实验室; 石河子大学医学院第一附属医院; 陕西省人民医院