Aβ25-35对SH-SY5Y细胞Bcl-2、Bax基因启动子区DNA甲基化的影响

作者：郭敏; 张宪武; 马天宇; 张宏; 苏苗; 武燕; 李刚

来源：中国药理学通报, 2016, 32(08): 1158-1164.

• SH-SY5Y细胞
• amyloid-β
• 凋亡
• DNA甲基化
• DNA甲基化酶
• Bcl-2
• Bax

目的探讨Aβ25-35介导SH-SY5Y细胞Bcl-2、Bax基因表达改变是否通过基因启动子区甲基化的机制。方法不同浓度Aβ25-35(0、25、50μmol·L-1)分别作用于体外培养的SH-SY5Y细胞48、72 h,MTT法确定Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞凋亡的最佳浓度和时间。Western blot检测不同药物处理组细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达变化,Real time PCR检测DNA甲基化酶DNMT1、DNMT3a、DNMT3b、Me CP2的mRNA水平。Methylation specific PCR(MSP)法分析Aβ25-35介导的Bcl-2、Bax基因启动子区甲基化水平的变化。结果 25μmol·L-1Aβ25-35暴露SH-SY5Y细胞72 h后,MTT检测细胞存活率达(68.49±9.83)%,与对照组比较明显降低(P<0.05),表明成功建立了AD细胞凋亡模型。Western blot结果显示,Aβ25-35药物处理组与空白组比较,Bcl-2表达明显减少,Bax表达明显增加。Real-time PCR结果显示,不同浓度的Aβ25-35药物组与空白组比较,DNA甲基化酶DNMT1、DNMT3a、DNMT3b、MeC P2表达无变化(P<0.05);MSP结果显示空白对照组Bcl-2和Bax甲基化扩增阴性,非甲基化扩增阳性;Aβ25-35处理组Bcl-2和Bax甲基化引物扩增阴性,非甲基化引物扩增阳性。结论 MSP结果显示Aβ25-35介导SHSY5Y细胞凋亡未引起Bcl-2、Bax启动子区甲基化的改变。

• 单位
  鄂尔多斯市中心医院; 内蒙古精神卫生中心; 内蒙古医科大学