沉默维生素D受体的表达对大鼠气道平滑肌细胞增殖及核因子-κB活化的影响题录

作者：邹淑梅; 郑曦; 赖国祥; 余宗阳; 宋颖芳^*

来源：中华结核和呼吸杂志, 2021, 44(06).

• 维生素D受体, 骨化三醇
• 肌细胞
• 肌, 平滑
• 细胞增殖
• 核因子-κB

目的研究沉默维生素D受体(VDR)基因表达对气道平滑肌细胞(ASMC)增殖能力的影响, 并初步探讨核因子-κB(NF-κB)在其中的作用。方法构建特异性靶向大鼠VDR基因的RNA干扰慢病毒载体。实验分组为空白组、空载体组和干扰组。嘌呤霉素抗性筛选后建立VDR基因稳定沉默的大鼠ASMC细胞株。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞生长周期;免疫荧光双标染色法检测 NF-κB p65的核易位情况;双荧光素酶报告基因法检测NF-κB依赖的转录活性, Western blotting法检测IκBα及p-IκBα蛋白的表达水平;放线菌素D处理细胞, 检测IκBα mRNA的稳定性。利用SPSS 23.0统计软件, 采用多组间单因素方差(One-Way ANOVA)分析; 组间两两比较采用SNK检验。结果 (1)与空白组与空载体组相比, 干扰组ASMC的A492 nm值及G2/M期细胞比例显著高(P<0. 05), 而G0/1细胞比例明显低(P<0.05)。(2)干扰组ASMC中NF-κB亚单位p65发生明显核易位;其NF-κB报告基因的相对表达量(1.37±0.28)较空白组(1.00±0.19, P=0.031)及空载体组(0.96±0.18, P=0.027)明显高。(3)干扰组中IκBα的蛋白表达量(0.13±0.04)显著低于空白组(0.29±0.05, P=0.023)及空载体组(0.32±0.07, P=0.014)。相反, 干扰组p-IκBα/IκBα为(0.86±0.04), 显著高于空白组(0.41±0.07, P=0.026)及空载体组(0.37±0.05, P= 0.017)。(4)干扰组ASMC的IκBα mRNA半衰期(171.31±9.67) min, 较空白组[(224.69±7.95) min, P=0.032]及空载体组[(230.41±6.37) min, P=0.035]明显短。结论沉默VDR的表达能促进ASMC的细胞增殖, 这一作用与其活化ASMC中的NF-κB信号通路有关。

• 单位
  厦门大学附属东方医院; 福建医科大学