用DREAM技术进行全长质粒快速定点突变

作者：张宝中; 冉多良; 张昕; 安小平; 单云竹; 周育森; 童贻刚

来源：生物工程学报, 2009, (02): 306-312.

DOI：10.13345/j.cjb.2009.02.020

• 定点突变
• 聚合酶链反应
• 设计限制酶辅助突变 site-directed mutagenesis
• polymerase chain reaction
• designed restriction enzyme ssisted mutagenesis

利用"设计限制酶辅助突变"(Designed Restriction Enzyme Assisted Mutagenesis,DREAM)进行全长质粒快速定点突变。根据突变位点附近氨基酸靶序列,以简并密码子进行逆向推导,这样在不改变氨基酸序列的前提下可以得到数目巨大的隐性突变体(Silent mutants),这些突变体中包含大量的限制性酶切位点,选择合适的酶切位点设计引物,用Phusion超保真DNA聚合酶扩增全长质粒的DNA序列,得到的PCR产物用T4多聚核苷酸激酶添加5′磷酸基团后进行平末端连接,转化大肠杆菌受体菌后用设计的酶切位点进行快速筛选。本研究用该方法成功地纠正了长约8 kb的质...

• 单位
  军事医学科学院; 病原微生物生物安全国家重点实验室; 新疆农业大学