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摘要
目的 应用原核表达系统制备重组新型冠状病毒依赖RNA的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase, RDRP),纯化后免疫新西兰大白兔获得高效价多克隆抗体，并对RDRP进行生物信息学分析。方法 鉴定正确的pET-22b RDRP质粒转化表达载体，诱导表达RDRP蛋白，纯化后免疫大白兔，间接ELISA法检测其多克隆抗体效价。运用Expasy PortParam、SWISS MODEL等生物信息学软件对RDRP蛋白的等电点、分子质量、亲疏水性等理化性质、蛋白的空间结构、跨膜结构域、磷酸化位点、蛋白信号肽进行预测；构建系统进化树，进行亲缘性分析。结果 pET-22b RDRP重组质粒酶切鉴定正确，经诱导重组蛋白以包涵体的形式表达，8 mol/L尿素梯度复性后得到纯度高的RDRP蛋白。用纯化蛋白免疫大白兔，间接ELISA检测血清抗体效价>1∶256 000,Western blot检测抗体具有良好特异性。经生物信息学分析RDRP蛋白为亲水性，非跨膜蛋白，且无信号肽。11种病毒系统进化树显示，SARS-CoV-2 RDRP蛋白与SARS-CoV RDRP亲缘关系较近。结论 成功获得重组SARS-CoV-2 RDRP蛋白，用该蛋白免疫大白兔能刺激产生高效价的多克隆抗体。预测与SARS-CoV RDRP亲缘关系较近，为亲水性非跨膜蛋白，为研究SARS-CoV-2 RDRP蛋白的生物学功能及其疫苗的制备奠定了基础。
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单位基础医学院; 潍坊医学院
