骨肉瘤细胞中Sestrin2的表达和定位

作者：沈涛; 陈之光; 李妍; 巴根; 郭然; 杨蕾; 郭洲洋; 付勤

来源：现代肿瘤医学, 2017, 25(07): 1011-1014.

DOI：10.3969/j.issn.1672-4992.2017.07.004

• hSesn2
• Western blot
• 免疫沉淀

目的:构建新型人源真核表达载体3*Flag-h Sesn2并同时检测其在骨肉瘤细胞中的表达及定位。方法:以GST-h Sesn2作为模板,利用聚合酶链反应扩增目的基因h Sesn2的c DNA全长,并将其克隆到含有3*Flag标签的真核表达载体中。进一步将构建的重组质粒酶切并测序分析鉴定,转染至MG-63骨肉瘤细胞中,提取细胞总蛋白后进行Western blot检测重组蛋白表达。此外利用荧光共聚焦激光扫描显微镜检测3*Flag-h Sesn2在MG-63细胞系中的定位,并最终利用免疫沉淀方法纯化人源Sesn2蛋白。结果:h Sesn2基因c DNA全长成功构建于含有3*Flag标签的真核表达载体中,利用Western blot检测3*Flag-h Sesn2融合蛋白表达,分子量约为55k Da。3*Flag-h Sesn2在MG-63骨肉瘤细胞系中主要定位于细胞质及核周,进一步成功纯化了h Sesn2蛋白。结论:成功的构建了含有3*Flag标签的人源Sesn2真核表达质粒,同时鉴定3*Flag-h Sesn2融合蛋白的表达,最终成功纯化h Sesn2蛋白。其中3*Flag-h Sesn2蛋白主要定位在细胞质和核周。

• 单位
  基础医学院; 中国医科大学; 中国医科大学附属盛京医院