2-酮基-L-古龙酸合成L-木糖的酶筛选及反应优化

作者：李冉; 宋聪; 张翔; 贾振华^*

来源：生物技术, 2021, 31(06): 540-545.

DOI：10.16519/j.cnki.1004-311x.2021.06.0083

• L-木糖
• 2-酮基-L-古龙酸
• 脱羧酶
• 生物合成

[目的]构建能够以2-酮基-L-古龙酸为底物合成L-木糖的工程菌。[方法]将马来酸醋杆菌(Acetobacter malorum)、驹形氏杆菌(Komagataeibacter pomaceti)、解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)、酸醋杆菌(Gluconacetobacter johannae)中的α-酮酸脱羧酶在大肠杆菌中重组表达，筛选功能性菌株，优化工程菌合成反应条件。[结果]构建了BL21(pET28a-AmDC)、BL21(pET28a-KpDC)、BL21(pET28a-YpDC)、BL21(pET28a-GjDC)四个工程菌，其中BL21(pET28a-YpDC)对100 mmol/L底物2-酮基-L-古龙酸的转化率>52%,产物L-木糖的纯度>99%。BL21(pET28a-YpDC)转化反应最适pH值为7.0,最适温度为37℃,最适Mg2+浓度为5 mmol/L,最适TPP浓度为10 mmol/L。[结论]筛选得到能够催化合成L-木糖的工程菌BL21(pET28a-YpDC),该菌株对2-酮基-L-古龙酸的转化率>52%,L-木糖纯度>99%。

• 单位
  河北省科学院生物研究所