热休克蛋白47在转化生长因子β1刺激的肾小管上皮细胞转分化中的作用

作者：毕慧欣; 刘瑞洪; 孙林; 刘虹; 袁曙光; 黄谷香; 谌南岚

来源：中华肾脏病杂志, 2013, 29(10): 775-781.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1001-7097.2013.10.009

• 转化生长因子β1
• HSP47热休克蛋白质类
• 上皮细胞
• 细胞转分化

目的阐明热休克蛋白47(HSP47)在转化生长因子β1(TGF-β1)刺激的人近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞)向间充质细胞转分化(EMT)中的作用及可能机制,探讨以HSP47为靶点抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞EMT过程。方法 Western印迹检测不同浓度TGF-β1(0、2.5、5、10μg/L)刺激HK-2细胞不同时间(0、12、24、48 h)后HSP47的表达;用10μg/L TGF-β1刺激HK-2细胞,Western印迹及实时定量PCR(real-time PCR)检测波形蛋白(vimentin)及紧密连接蛋白(zona occludens-1,ZO-1)的表达变化,Western印迹检测不同时间磷酸化(p)-Smad3及Smad3的表达;转染HSP47 siRNA及HSP47 siRNA阴性对照,对照组为无基因抑制效果的一段siRNA,再予TGF-β1刺激,Western印迹检测HSP47、p-Smad3及Smad3的表达,Western印迹及real-time PCR检测vimentin及ZO-1的表达。结果 TGF-β1干预HK-2细胞,HSP47蛋白呈浓度和时间依赖性表达上调(均P<0.05)。Western印迹、real-time PCR结果显示10μg/L TGF-β1刺激后,HK-2细胞vimentin蛋白及mRNA表达呈时间依赖性升高(均P<0.05),ZO-1蛋白及mRNA表达呈时间依赖性降低(均P<0.05)。Western印迹结果显示TGF-β1促进Smad3磷酸化,上调p-Smad3/Smad3表达(P<0.05),任30 min时达到峰值,随后稍下降,在24~48h达到另一峰值。与TGF-β1组相比,转染HSP47 siRNA后HSP47蛋白表达明显下调(P<0.05),同时ZO-1蛋白及mRNA表达上调(均P<0.05),vimentin蛋白及mRNA表达下调(均P<0.05);同时p-Smad3/Smad3表达下调(P<0.05)。结论 HSP47可促进肾小管上皮细胞EMT,可能与TGF-β1-Smad3信号通路活化有关。

• 单位
  中南大学湘雅二医院