牛病毒性腹泻/黏膜病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

作者：常敬伟; 邢思毅; 常春龙; 毕莹; 王士霞; 李田田; 周玉龙; 倪宏波

来源：黑龙江八一农垦大学学报, 2016, 28(06): 74-78.

• 牛病毒性腹泻病毒
• E2蛋白
• 间接ELISA

为建立一种检测牛病毒性腹泻、黏膜病病毒抗体的间接ELISA方法,利用昆虫细胞真核表达系统成功表达E2蛋白并纯化,使用纯化后的蛋白作为包被抗原。确定最佳抗原包被浓度为6μg·m L-1,最佳血清稀释度为1∶80,最佳包被液为碳酸缓冲液,最佳盐封闭液为5%脱脂乳,最佳血清作用时间为60 min,酶标抗体作用最佳浓度为1∶10 000;最佳底物作用时间为5 min,阳性临界值为D450 nm≥0.282。与IDEXX的BVDV间接ELISA试剂盒比较,总符合率为91.5%,板内和板间重复性试验变异系数均小于10%。该方法与牛副流感病毒Ⅲ型、牛传染性鼻气管炎病毒、牛呼吸道合胞体病毒和牛冠状病毒阳性血清无交叉反应。因此,该ELISA诊断方法可用于大批量样本抗体水平监测和流行病学调查。

• 单位
  动物科技学院; 黑龙江八一农垦大学