摘要
以ATDC5细胞为研究对象,分别添加Dhh重组蛋白或转染Dhh干扰片段,应用MTS法、流式细胞术及荧光定量PCR等方法,对Dhh在ATDC5细胞增殖与分化中的作用进行研究。结果显示,Dhh高表达于ATDC5细胞中,添加rDhh可显著增强ATDC5细胞的增殖活性,降低G1期细胞百分比,提高S期细胞数量。通过荧光定量PCR检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1,Ccnd1)、Ccnd2、Ccnd3和Ccne1以及细胞周期蛋白依赖性激酶2(Cyclin-dependent kinase 2,Cdk2)、Cdk4和Cdk6表达的变化。结果显示,添加rDhh可显著提高Ccnd1、Ccnd2、Ccnd3和Ccne1的表达,同时Cdk2、Cdk4和Cdk6的表达也显著增加。添加rDhh可显著提高肥大软骨细胞标志分子Col X和Runx2 mRNA的表达,而转染Dhh siRNA后可降低Col X和Runx2 mRNA的表达。以上结果说明,Dhh对ATDC5细胞的增殖和分化过程起到促进作用。
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