本发明公开了一种交叉引物恒温技术检测MRSA肠毒素的引物、试剂盒及方法。本发明针对MRSA肠毒素SEA设计的CPA引物包括剥离引物4s、5a,交叉扩增引物2a1s以及特异引物2a、3a;其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1-SEQ IDNO.5所示。构建的交叉引物恒温扩增体系可以通过反应体系的荧光染料显色实现1小时左右判断fg/μL级肠毒素SEA的存在,解决了现有技术方法所需周期长、灵敏度低、成本高、现场应用困难等缺陷。