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摘要
随着细胞治疗的快速发展，大规模慢病毒的生产成为工艺环节中的瓶颈，因此，优化293T高滴度和高纯度的CAR慢病毒载体生产工艺显得至关重要。本研究旨在优化包装慢病毒的293T贴壁细胞，节省时间，节约成本，提高慢病毒包装的能力。同时对优化慢病毒载体中出现悬浮细胞结团生长的现象进行探索，检测其影响结团的因素。分别采用快速、慢速驯化方式将293T贴壁细胞驯化为悬浮培养，并比较其细胞形态、细胞密度、细胞活率、慢病毒包装能力和冻存复苏后稳定一致性，筛选出最优的悬浮驯化条件。通过调节Ca2+浓度和EDTA添加量来研究比较细胞结团生长状况。结果证明，使用无血清培养基OPM-293 CD05溶剂（medium）可以将293T贴壁细胞快速驯化为293T悬浮细胞，并能制备出慢病毒滴度且优于贴壁细胞的包装滴度（*P2+浓度会影响细胞结团大小，添加EDTA能有效分离分散非必要的细胞抱团生长。研究结果显示，传统293T贴壁细胞可以使用无血清培养基OPM-293 CD05溶剂快速驯化成悬浮细胞；在一定范围内，Ca2+浓度越高细胞所结团块及粒径越大，EDTA添加量越高细胞所结团块及粒径变小。这为优化慢病毒载体包装工艺和悬浮培养条件，同时为体外规模化细胞培养放大和生产奠定了理论基础，具有一定的实用价值。
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