小儿广朴止泻口服液治疗腹泻机制的预测及初步验证

作者：陈琦; 张亚云; 张丹丹; 夏杨; 孙丽; 曹思瑶; 卞慧敏^*

来源：中草药, 2022, 53(08): 2390-2398.

DOI：10.7501/j.issn.0253-2670.2022.08.016

• 小儿广朴止泻口服液
• 腹泻
• IEC-6细胞
• 抗炎
• 凋亡
• 分子对接
• 啤酒甾醇
• 芦丁

目的 通过数据库预测和分子对接技术探究小儿广朴止泻口服液治疗腹泻的活性成分和作用机制,并在大鼠小肠上皮IEC-6细胞上进行初步实验验证。方法 通过中药系统药理学平台(TCMSP)数据库和文献检索获取小儿广朴止泻口服液的化学成分;采用GeneCards和DisGeNET数据库获得腹泻相关基因,构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction network,PPI)网络获得小儿广朴止泻口服液治疗腹泻的重要靶点,并进行基因本体(gene ontology,GO)功能及京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析;使用Autodock Vina软件进行分子对接验证。采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导IEC-6细胞损伤模型,采用MTT、ELISA法检测小儿广朴止泻口服液对细胞凋亡及炎症的影响,并通过Western blotting法验证其可能的作用机制。结果 小儿广朴止泻口服液的主要活性成分有63个,预测获得重要靶点86个,核心靶点28个;GO功能和KEGG通路富集分析显示小儿广朴止泻口服液主要调控了机体炎症反应、细胞增殖、细胞凋亡等生物过程,涉及肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)、缺氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)以及磷酸肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)-蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)等信号通路。体外结果表明小儿广朴止泻口服液能显著升高LPS诱导的IEC-6细胞存活率(P<0.01),显著抑制炎症因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β和TNF-α的分泌(P<0.01),显著下调剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved cystein-asparate protease-3,cleaved Caspase-3)、Caspase-8、核因子-κB p65(nuclear factor-κB p65,NF-κB p65)蛋白表达(P<0.01),上调β-catenin蛋白表达(P<0.01)。结论 小儿广朴止泻口服液可能通过抑制炎症反应和细胞凋亡治疗腹泻。

• 单位
  南京中医药大学