牛血清中牛腺病毒3型EvaGreen qPCR检测方法的建立

作者：贺倩; 鱼轲; 郭敏; 李永佳; 司璐; 刘军; 李佳林; 魏至栋^*

来源：微生物学免疫学进展, 2022, 50(04): 15-20.

DOI：10.13309/j.cnki.pmi.2022.04.004

• 外源病毒
• 牛腺病毒3型
• 实时定量PCR
• EvaGreen

目的 建立EvaGreen qPCR检测牛腺病毒3型(bovine adenovirus 3, BAV3)的方法，用于牛血清等牛源材料的检测。方法 依据GenBank公布的BAV3标准毒株WBR-1全基因序列，基于E2B区域高度保守序列设计引物，提取并制备DNA标准品，建立EvaGreen qPCR检测BAV3的方法，并对该方法的特异性、灵敏度及精密度进行验证。最后利用该方法检测牛血清中的BAV3,并与细胞培养法及荧光抗体检测对比，以验证该方法的适用性。结果 建立的EvaGreen qPCR检测BAV3的方法标准曲线R2>0.99,扩增效率处于90%～110%,可检测范围为0.2×100～0.2×107 copies/μL。实验内Ct值的CV<2.2%,在不同实验间Ct值的CV<1.8%。设计的BAV3引物与牛腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus, BVDV)、副流感病毒3型(parainfluenza virus 3, PI3)、呼肠孤病毒(reovirus, REO)、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)、狂犬病毒(rabies virus, RV)、羊轮状病毒(Lanzhou lamb rotavirus, LLR)基因组均无交叉反应，特异性良好。采用EvaGreen qPCR对198份新生牛血清进行BAV3检测，阳性检出率为10.1%,检出率高于细胞培养法及荧光抗体检测。结论 成功建立了EvaGreen qPCR检测BAV3的方法，该方法快速、灵敏、特异、易于标准化，可用于牛血清中BAV3的检测。

• 单位
  兰州生物制品研究所有限责任公司