抗禽流感病毒(H5N1)入胞单分子抗体过表达慢病毒载体的构建及其稳转细胞株的建立

作者：王瑜; 孙赫; 岳玉环; 吴广谋; 张国利; 邱月; 蔄弘扬; 田园^*; 李泽鸿^*

来源：中国兽医学报, 2022, 42(09): 1769-1774.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2022.09.06

• 单分子抗体
• 慢病毒载体
• Western blot
• 转染

构建过表达抗禽流感病毒(H5N1)M1蛋白入胞单分子抗体(TAT-ScFv-mFc)的慢病毒载体，筛选获得稳定表达TAT-ScFv-mFc的HEK293T稳转细胞株。PCR扩增目的基因，将其插入质粒pLVX-mCMV-ZsGreen1-Puro中，构建pLVX-TAT-ScFv-mFc-ZsGreen1-Puro慢病毒过表达质粒，对重组质粒进行慢病毒包装后使用转染试剂复合物转染HEK293T细胞系，并使用嘌呤霉素(Puro)筛选阳性表达细胞，经过扩大培养及裂解后，以ProteinG纯化目的蛋白并对蛋白纯品进行鉴定。Western blot检测结果显示，成功获得了稳定表达TAT-ScFv-mFc的HEK293T细胞株。ELISA、SDS-PAGE、BCA结果显示成功获得预期目的蛋白2 mL(0.39 g/L)。结果表明，本研究成功建立了稳定表达抗H5N1病毒抗体的293T细胞系，为进一步研究TAT-ScFv-mFc的功能结构奠定了基础，也同时为真核表达系统的抗体制备研究提供了参考依据。

• 单位
  中国农业科学院; 吉林农业大学; 生命科学学院