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摘要
本研究旨在探究鳕鱼皮免疫活性肽的最优制备条件以及对RAW 264.7巨噬细胞免疫功能的影响。实验以鳕鱼皮为原料,选用胃蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶以及木瓜蛋白酶对其进行酶解,通过MTT法细胞增殖实验,以巨噬细胞RAW 264.7的相对增殖率为筛选指标,从4种实验酶种里选出最佳酶种;通过单因素和L9(34)正交试验在最佳酶种的基础上确定最佳酶解条件。将酶解液超滤分成4组分子段,检测不同分子段对RAW 264.7细胞的增殖率,并在倒置显微镜下观察细胞形态的变化。结果表明提取鳕鱼皮免疫活性肽的最优蛋白酶为碱性蛋白酶,其最优酶解条件:酶解时间7 h、加酶量2 500 U·g-1、pH为8、酶解温度50℃,经超滤得到的<1 kD的肽段对RAW 264.7细胞有明显的促增殖作用。随着酶解液浓度的升高,细胞出现分化和伪足的数量也明显增多。因此碱性蛋白酶酶解所得的鳕鱼皮活性肽能够增强RAW 264.7细胞的免疫活性。
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