桃红四物汤逆转斑马鱼模型糖皮质激素性骨质疏松的研究

作者：赵蓉; 蒋俊^*; 肖世长; 谭朝林; 王福元; 徐希明^*; 夏海建

来源：药学学报, 2019, 54(02): 313-320.

DOI：10.16438/j.0513-4870.2018-0658

• 桃红四物汤
• 骨质疏松
• 斑马鱼
• 糖皮质激素
• 成骨细胞

本文研究桃红四物汤(Tao Hong Si Wu decoction, THSWD)对糖皮质激素性骨质疏松的治疗作用及其机制。精密称量THSWD中9种有效成分的标准品,配制标准品储备液,稀释得到一系列浓度的标准液,建立标准曲线。按复方比例称取THSWD各成分,提取,通过高效液相色谱法测定其中9种有效成分的含量。自然交配得到斑马鱼胚胎。孵化后,用空白E3培养基培养至受精后3天(3 days post fertilization, 3DPF),分为对照组(空白E3培养基)、泼尼松龙组(25μmol·L-1 prednisolone, PNSL)、依替膦酸二钠组[15μmol·L-1 disodium ethydronate (DE)和25μmol·L-1 PNSL]、THSWD组(0.1、1.0或10.0μg·mL-1 THSWD和25μmol·L-1 PNSL),每组15只幼鱼。继续培养至10 DPF,将斑马鱼麻醉处死,用茜素红S (alizarin red S, ARS)染色,在显微镜下观察其骨骼的染色情况;对斑马鱼的骨矿化面积和累积光密度进行定量分析;用实时PCR定量检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, AKP)、I型胶原蛋白(type I)、人类相关转录因子2 (runt-related transcription factor 2, RUNX-2)、血清骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、抗酒石酸酸性磷酸酶5b (TRACP)和骨钙素(osteocalcin, OCN)基因的表达;用电感耦合等离子体质谱法测定斑马鱼体内的矿物含量。结果显示,在THSWD的水提液中, 9种有效成分的浓度顺序为:没食子酸>羟基红花黄色素A>绿原酸>洋川芎内酯H>阿魏酸>咖啡酸、洋川芎内酯Ⅰ>香豆酸>苯甲酸。与对照组相比,用25μmol·L-1泼尼松龙处理斑马鱼可显著降低其矿化骨面积和累积光密度, AKP、type I、RUNX-2、OPG、OCN基因的表达也有显著性降低,斑马鱼的Ca、P、K、Mg、Zn和Fe水平分别降低了2.8、2.4、13.8、6.6、8.0和8.8倍;与泼尼松龙组相比,经THSWD干预治疗后,斑马鱼的骨矿化面积和累积光密度值有显著性地升高,且呈剂量依赖性,相关基因的表达也有明显增加,斑马鱼Ca、P、K、Mg、Zn和Fe水平均显著高于泼尼松龙组。结果表明, THSWD能够增强成骨细胞活力,促进骨胶原表达和骨矿化,从而增加骨量,具有潜在的逆转糖皮质激素性骨质疏松作用。

• 单位
  江苏大学附属医院; 江苏大学